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1．大鼠250-300g乙醚麻醉，无菌条件下分离两侧颈总动脉并分别置线备用。
2．在大鼠背部正中枕骨后第一、二颈椎位置做1厘米长切口，从中央向两侧分离背阔肌和斜方饥，然后借显微镜分离下暴露第一颈椎的横突翼，并找到左、右横突孔（椎动脉入脑前从此孔通过），用直径为0.5电凝针插入横突孔灼断除假手术组外其余各组大鼠双侧椎动脉，缝合伤口。
3. 当大鼠处于麻醉状态下时,在颅骨钻孔,安置电极,记录脑电图；并作尾动脉插管以记录血压，PaO2 、PaCO2、PH。
4．术后24小时后，大鼠清醒，脑电图恢复正常，拆除颈部缝合线，用动脉夹夹闭双侧颈总动脉，5-30米min，脑电变平时开启动脉夹进行脑再灌流.
5．随即各组动物静脉注射给药一次，手术后次日，再次静脉注射给药一次，
**** 术中及术后麻醉清醒前用烤灯维持动物体温(37.0±0.5)℃，实验室温保持在(24～25)℃
脑梗面积
随后断头处死各组大鼠， 除嗅球、小脑和低位脑干，置于冰盐水中10min，冠状切成五片2mm厚脑片，迅速将脑片置于2%氯四氮唑（TTC）磷酸缓冲溶液中，37℃避光温孵染色30min，其间每隔7～8min翻动一次，染色后正常脑组织呈兰色，梗塞组织呈白色。温孵完毕后用数码相机拍照双侧脑片，输入计算机并采用图像处理软件计算梗塞面积，求出每鼠5片脑片总梗塞面积与脑片总面积之比。
生化指标
断头处死大鼠，迅速将头置于液氮中，15min后剥离出全脑，称重并求脑指数[g·(100g体重)-1]。然后将全脑置于2ml Tris-HCl缓冲液中（0℃，pH 7.4）匀浆30s（700r·min-1），再加缓冲液至6ml，于冷冻离心机内（4℃）3000r·min-1离心30min，取上清液，酶法测乳酸、ATP和磷酸肌酸等含量。
